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包括阿西替尼(axitinib)（Axitinib）在内的酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)因其抗血管生成特性已被引入到肾细胞癌(RCC)的医治中。然而，目前还没有证据表明阿西替尼(axitinib)在肾细胞癌中具有直接的细胞毒性抗癌活性。
在这里，我们通过western blot分析报告了阿西替尼(axitinib)诱导的DNA损伤反应(DDR)，最初的特点是γ-H2AX磷酸化和Chk1激酶激活，随后在a -498和Caki-2 RCC细胞中p21过表达，尽管其效力不同。通过免疫细胞化学分析细胞DNA中8-oxo-7,8-二氢-2 ' -脱氧鸟苷的存在，并使用对氧化还原敏感的荧光染料DCFDA进行流式细胞术分析，表明DDR反应伴随着DNA氧化损伤和活性氧(ROS)的产生。这种反应导致G2/M细胞周期阻滞，并诱导类似衰老的表型，伴有细胞增大和衰老相关的β-半乳糖苷酶活性延长，n -乙酰半胱氨酸(NAC)预处置可消除这种活性。此外，阿西替尼(axitinib)处置过的细胞通过有丝分裂灾难进入细胞去世，荧光显微镜观察，其特点是微核和异常微管组装。
另一方面，阿西替尼(axitinib)（Axitinib）通过DDR诱导，也能延长表面NKG2D配体的表达。因此，药品医治以ros依赖的方法促进了a -498 RCC细胞的NK细胞识别和脱颗粒。
总之，我们的结果表明，阿西替尼(axitinib)（Axitinib）对RCC细胞的细胞毒性和免疫调节作用都有助于抗癌活性。
TKIs特殊是阿西替尼(axitinib)（Axitinib）最近被批准用于晚后期mRCC的医治，主要是因为其抗血管生成的特性。在此，我们提供的证据表明，阿西替尼(axitinib)抗癌活性也可能是其诱导DDR、细胞衰老和有丝分裂灾难的能力，并通过激活配体的调节，增强天然免疫效应细胞对RCC细胞的识别。
特殊是，我们发现亚最好剂量的阿西替尼(axitinib)医治RCC可引发DDR，其表现为H2AX、Ser317-和Ser345-Chk1磷酸化水平和DNA氧化水平上升，导致细胞周期阻滞在G2/M期和细胞衰老。在随后的时间点，观察到细胞周期抑制剂p21过表达，Chk1激活和耗尽水平相应减少。因此，在PC-3前列腺癌细胞中，通过逆转录病毒介导的p21转导激活衰老程序，能够抑制Chk1激活。
我们还研究了氧化还原讯号参与阿西替尼(axitinib)（Axitinib）医治诱导A-498和Caki-2 RCC细胞衰老的能力。我们发现，药品暴露延长了ROS的生成并诱导了DNA的氧化，而用抗氧化剂NAC预处置会导致受损的细胞周期阻滞和SA-β-gal阳性细胞的百分比下降。
与我们的研究类似，据报道，用阿西替尼(axitinib)（Axitinib）医治胃癌细胞可诱导衰老表型，其特点是细胞大小延长，SA-β-半乳糖苷酶表达，G2细胞周期期阻滞。
细胞周期阻滞和衰老常与有丝分裂灾难有关。Chk1是调节G2/M检测点的激酶，在dna损伤剂处置的细胞中，对防止有丝分裂灾难也特殊重要。有丝分裂灾难被描述为恶性肿瘤药物诱导的细胞去世的主要形式[48,49]。与坏死相似，有丝分裂灾难表现为质膜完整性的初期丧失，大细胞中含有未浓缩的染色体[50]。阿西替尼(axitinib)医治导致细胞发生坏死样去世和继发性坏死的频率延长，以及以多核、微管组装异常、初期膜通透和caspase 3活化和DNA片段等凋亡特点缺失为特点的有丝分裂灾难。
我们还证明了MICB对A-498 RCC细胞和ULBP-1对Caki-2细胞的诱导需要ROS讯号作为配体上调，这对NAC预处置是敏感的。相比之下，在NAC预处置的Caki-2细胞中，阿西替尼(axitinib)诱导的MICA表达延长没有明显的逆转。此外，根据之前的证据，NKG2D和dnam1配体在基因毒性药品[52]医治的衰老表型肿瘤细胞上表达，我们发现MICB在阿西替尼(axitinib)医治的衰老a -498 RCC细胞上优先表达。与阿西替尼(axitinib)一样，其他TKIs如索拉非
尼(sorafenib)和舒尼替尼(sunitinib)已被描述诱导鼻咽癌细胞[53]中MICA/B的表达，但它们与衰老表型的相关联性尚未报道。
基于这些发现，阿西替尼(axitinib)（Axitinib）与其他免疫医治方式(如抗程序性去世-1 (PD-1)或pd -配体-1 (PD-L1))的顺序或联用策略，应在前瞻性临床实验中进行试验。因此，一项I期研究正在评估阿西替尼(axitinib)联合抗pd - l1抗体avelumab (MSB0010718C)在晚后期RCC (NCT02493751)患病者中的安全特性。
总之，我们的研究首先证明，阿西替尼(axitinib)（Axitinib）不仅抑制血管生成，而且能够通过诱导细胞周期阻滞和有丝分裂灾难，激活细胞衰老程序，对RCC细胞产生直接的基因毒性作用。阿西替尼(axitinib)对RCC细胞的直接细胞毒性作用可能部分解释了这种药品的相关胃肠道和血液学毒性。
此外，阿西替尼(axitinib)（Axitinib）还能够通过调节NK激活配体的表达，促进NK细胞介导的对RCC的识别和消除，从而显示免疫介导的抗癌活性。更好地剖析RCC微环境中免疫细胞的功能和TKIs的免疫调节作用将是优化晚后期RCC患病者免疫医治方式的关键。【微信：yaodaoyaofang】扫描下方二维码了解更多：
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